干细胞温和消化酶(500mL/瓶)

简要描述:
干细胞温和消化酶专门用于干细胞的消化,包括脐带间充质干细胞,脂肪间充质干细胞,胚胎干细胞(ES)等。 消化作用其温和,对细胞的损害小。

产品描述

干细胞温和消化酶

【干细胞温和消化酶   用途与描述】

专门用于干细胞的消化,包括脐带间充质干细胞,脂肪间充质干细胞,胚胎干细胞(ES)等。
消化作用温和,对细胞的损害小。为目前干细胞临床研究与临床应用领域的新产品。

本产品特别适用于大规模生产干细胞的企业。消除了导致干细胞培养失败的重要隐患——消化过度问题。
本产品也特别适用于干细胞药物的研究与开发企业。无动物来源组分,成分明确,降低了干细胞药物申报的验证工作量与申报难度。

【干细胞温和消化酶   规格与保存】

          产品名称          

          产品货号          

                    规格与保存                    

干细胞温和消化酶

NC1004.1

500mL/瓶,2-8℃保存,效期12个月

干细胞温和消化酶

NC1004.2

100mL/瓶,2-8℃保存,效期12个月

【干细胞温和消化酶   产品特点】

1. 产品容错性好。
即便消化时间长达15分钟,对干细胞的后续传代也几乎没有影响。减少了对操作人员技能的要求。

2. 即取即用,不需等待。
4℃可稳定保存一年,不再需要-20℃保存。

3. 纯人工合成,无动物来源组分。
无感染疯牛病毒(天然牛胰酶)或口蹄疫病毒(天然猪胰酶)的可能性,成分明确。

【干细胞温和消化酶   产品性能】

 新一代消化产品(温和消化酶)与传统消化产品(猪牛天然胰酶)对比表

项目类型

细分类别

传统产品

 新一代产品

消化性能

正常消化
(未消化过度)

细胞活率

85%
95%以上
消化后继续培养得到的细胞数
1.06x106
1.14x106

超时消化
(消化过度)

细胞活率60%95%以上
消化后继续培养得到的细胞数0.64x1061.08x106

极端消化
(15分钟消化)

细胞活率0-10%
90%以上
消化后继续培养得到的细胞数无法收获细胞
1.04x106
使用便利程度

消化后是否需要终止?

需要不需要

是否需要-20℃保存?

需要不需要

是否可以即取即用?

不可以可以
使用综合成本
终止消化的成本

高。
需要使用血清、完全培养基或胰酶抑制剂。

低。
不需终止消化。 加细胞培养上清稀释即可。

细胞应用前病毒检测的成本

高。
需检测猪口蹄疫、牛 疯牛病等动物病毒。

0成本。
无动物源,所以无需检测

产品安全性

是否无动物来源组分?

不是

是否可以确知无动物病毒?

不可以可以
细胞药物申报难度

产品的残留影响的证明难度

大。
各种杂质组分不明, 难以证明。

小。
成分明确,均为人工 合成的组分。

 上述数据为接种脐带来源的MSC的P2代种子细胞,T25培养瓶,接种密度8000 cells/cm2,72小时后消化所得P3代细胞的对应数据。

正常消化(未消化过度)时,温和酶 确定好于 传统胰酶。

P2代MSC种子细胞,传代培养72小时后,分别用温和酶和传统胰酶消化,得到P3代MSC细胞,检测消化后的细胞活率。
P3代MSC细胞继续培养72小时,分别用温和酶和传统胰酶消化,收获P4代MSC细胞,细胞计数。

细胞数量方面相差不大:温和酶比传统胰酶多出 7%。
细胞活率方面相差较大:温和酶比传统胰酶高出10%。

对比类别
传统胰酶
温和消化酶
P3代MSC细胞活率85%
95%
收到的P4代MSC细胞数量1.06x106cells1.14x106cells

复苏P2代MSC种子细胞,连续传代3次,分别用温和酶和传统胰酶消化。
细胞数量方面:每一代温和酶均比传统胰酶多出 5%-10%。
两种酶 MSC扩增倍数对比.jpg

4℃可稳定保存一年,不再需要-20℃保存。
干细胞温和消化酶稳定性监测.jpg

干细胞温和消化酶在4℃环境下保存14个月,在超过有效期两个月后,酶活性仍保持在96%。

操作更便利,消化后不需终止消化,细胞培养上清稀释即可。

传统胰酶消化细胞后,需要额外添加血清,或完全培养基,或胰酶抑制剂,结合胰酶的消化位点,以达到终止消化的目的。
温和消化酶由于其设计原理,在消化细胞后,不需要终止消化,只需要添加细胞培养上清,稀释消化酶,离心去除即可。便利了操作。

成分明确,无任何动物来源组分,更安全。更适合临床研究、临床应用或药物申报用途。

传统胰酶,取自牛或猪羊的胰脏,经后期纯化结晶而得。动物来源与提取工艺决定了传统胰酶难以避免感染动物病毒,如疯牛病毒,猪口蹄疫病毒等。因此难以应用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
温和消化酶,为全人工合成酶,消化位点清晰,经原核或真核系统表达,生产过程无任何动物来源组分的引入,所以安全性高,尤其适用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。

超时消化(消化过度)时,温和酶可多收细胞 68%。

分别超时2min消化MSC细胞,后传代培养72小时,收获细胞进行计数:
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 68%。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞,培养后镜下细胞形态杂乱。

两种酶超时2min消化MSC数据对比.jpg

传统胰酶延长消化2minMSC照片.jpg传统胰酶延长消化2min-传代72h照片.jpg
传统胰酶延长消化2分钟,MSC的细胞照片传统胰酶消化后,传代72h 后的细胞照片
温和消化酶延长消化2minMSC照片.jpg干细胞温和酶延长消化2min-传代72h照片.jpg
温和酶延长消化2分钟,MSC的细胞照片温和酶消化后,传代72h 后的细胞照片

 极端消化(消化15分钟)时,温和酶基本不受影响。传统胰酶完全失败。

分别 15min消化MSC细胞,后传代培养72小时,收获细胞进行计数:
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 11倍。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞,培养后镜下细胞形态杂乱。

两种酶超时15min消化MSC数据对比.jpg

传统胰酶延长消化15minMSC照片.jpg传统胰酶延长消化15min-传代72h照片.jpg
传统胰酶延长消化15分钟,MSC的细胞照片传统胰酶消化后,传代72h 后的细胞照片
温和消化酶延长消化15minMSC照片.jpg干细胞温和酶延长消化15min-传代72h照片.jpg
温和酶延长消化15分钟,MSC的细胞照片温和酶消化后,传代72h 后的细胞照片

客户问答

Q: 为什么要开发干细胞温和消化酶产品?

A:消化过度与生长过密是干细胞培养失败的前两大原因。在生产级的大规模培养中,消化过度更是一个难以控制的工艺难题。温和消化酶就是为了解决这个问题而设计的:在该产品的消化时间挑战实验中,浸润在温和酶中长达30min的干细胞,细胞活率均能保持在90%以上,表型正常,且后续传代正常。

Q:干细胞温和消化酶的保存温度条件是2-8℃。我如果-20℃保存,会不会更好?

A:不会更好,会更差。温和酶是特殊设计的重组蛋白酶产品,蛋白结构稳定,在2-8℃条件下可稳定保存。
若放置-20℃环境,会涉及反复冻融问题,会导致该重组蛋白酶活性下降,细胞消化时间延长。 


Q:温和消化酶消化细胞后,需要添加培养基或胰酶抑制剂终止消化过程吗?

A:不需要。细胞变圆后添加细胞培养上清稀释即可。体积为添加的消化酶的2倍体积,可降低用户使用成本。


Q:在消化时间方面,温和消化酶与传统胰酶有什么差别?

A:温和消化酶消化时间要稍长一些。消化干细胞需要2-5min左右的时间。


Q:添加完细胞培养上清稀释后,可不离心去除消化酶吗?

A:不可以。残留的消化酶会影响后续干细胞的培养过程,会导致干细胞的形态变化。


Q:用无血清培养基及含血清培养基培养的干细胞,在使用温和酶消化方面有什么异同?

A:相同之处是:无论使用何种培养基,在消化前均需要使用无钙镁离子的缓冲液冲洗细胞。
不同之处:如果使用无血清培养基,清洗一次即可。
如果使用血清培养基,需要连续清洗细胞三次,以确保无血清残留,否则消化时间会变长。

使用说明

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背景知识

传统的胰蛋白酶是无差别的切割蛋白的精氨酸及赖氨酸C末端形成的肽键。消化过程属于“非特异性消化”。
胰酶只要接触到细胞,就持续不断的消化所能接触的蛋白,直至细胞成为碎片。

友康生物构建的干细胞温和消化酶,作用位点清晰,仅特异性消化细胞与细胞之间,以及细胞与培养瓶之间的细胞基质。避免消化细胞外层蛋白。属于“特异性消化”。
即使干细胞浸润在温和酶中15min,细胞活率仍可保持90%以上。

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